EDC/NHS交联方法的使用已经非常成熟了,一般将纳米粒子表面用羧基或氨基功能化处理,之后偶联纳米粒子与抗体上的羧基或氨基,完成抗体的偶联。我们在Thermo Fisher上找到了一般的步骤和注意事项。EDC和Sulfo-NHS在pH 4.5-7.2的水溶液中活化羧基具有佳活性,但Sulfo-NHS活化后的分子与氨基的反应在pH 7-8的水溶液中才具有佳活性。
早在八十年代, Bains W. 等人就将短的 DNA 片断固定到支持物上,借助杂交方式进行序列测定。但基因芯片从实验室走向工业化却是直接得益于探针固相原位合成技术和照相平板印刷技术的有机结合以及激光共聚焦显微技术的引入。它使得合成、固定高密度的数以万计的探针分子切实可行,而且借助基因芯片激光共聚焦显微扫描技术使得可以对杂交信号进行实时、灵敏、准确的检测和分析。产品即将或已有部分投放市场,产生的社会效益和经济效益令人瞻目。
与其他芯片制作技术相比较,微珠芯片具有如下优势:
(1) 密度高微珠芯片的点样密度是原位光合成法的16倍,喷点法的100倍,接触式点样的400倍。
(2)测试重复性好鉴 于超高密度的特点,微珠芯片中每个样品都能保证约30个重复,从而保证测试的高重复性、高重复串以及高可靠性。
(3)定制方便若需要在已完成的芯片中增加测试点或新基因,只要合成相应的微珠加入到微珠混合池中即可。
(四)基因芯片数据分析
基因芯片分析包括五个基本步骤:生物学问题、样品制备、生物化学反应、检测、数据模型分析。基因芯片数据分析包括两部分,数据可靠性分析和生物学意义分析。
2.APES(3-氨丙基-乙氧基)
APES必须现用现配。用此方法黏合的玻片应垂直烤片而不能水平烤片,否则,组织片中易出现气泡。 APES的使用方法:用50倍稀释(APESl份、49份混合),将洗净的玻片放人稀释好的APES中,停留20~30秒,取出稍停,再人纯或蒸馏水中涮去未结合的APES。置通风橱中晾干即可。注意用APES防脱片处理的载玻片捞片时组织应一步到位.并尽量减少气泡存在,以免影响染色结果。注意不要将APES与其他防脱混合使用。