感受完这种粗糙度之后,2010年就有人把疏水蛋白引入到检测中,改善这种基质表面抗体堆积不均匀的情况。疏水蛋白能够自组装形成10nm厚的两亲性膜,疏水性一侧贴在疏水性的聚板上,亲水性的一侧伸向溶液中,可以物理吸附抗体,用于组装一抗。石英晶体微天平结果显示在pH=5时,聚板上形成一层致密的膜;X射线光电子能谱和水接触角测试显示疏水蛋白修饰后,疏水的聚板能够保持长达3个月的亲水性;原子力显微镜结果显示,连接到疏水蛋白上的抗体也终于站起来了,是一种“end-on”的取向排列。
使用广泛的氨基和羧基偶联剂就要数EDC和NHS(Sulfo-NHS)了。大多数情况下,同时使用EDC/NHS的交联于只使用EDC的,NHS的使用能够极大增强偶联效率。但也有个例,比如2012年的一篇工作(Diagnostics (basel). 2012 Aug 27;2(3):23-33.),他们在APETS修饰的金芯片和96孔板表面组装一抗,发现单独使用EDC比同时使用EDC/NHS和EDC/Sulfo-NHS都。
二、黏附剂的使用
1.多聚左旋赖氨酸(poly-1-lysine)
首先配制0.1%(ω/υ)多聚左旋赖氨酸浓缩液,室温下(18~26℃)可保存1年。使用时,将试剂10倍稀释成工作液,浓度为0.01%(ω/υ),2-8℃冰箱保存,有效期3个月。使用方法是将充分洗净和预先干燥的玻片浸泡于稀释后的多聚左旋赖氨酸溶液数十秒或提拉十次,沥干.于室温下晾干12-24小时或在45℃以下烤箱内烘干。处理后的玻片避光干燥可保存三个月。