动物模型设计注意事项
注意所选用动物的实用价值
模型应适用于多数研究者使用,容易,实验中便于操作和采集各种标本。同时应该一般饲养员较熟悉而便于饲养的动物作研究对象,这样,就无需特殊的饲养设施和转运条件,经济上和技术上容易得到保证。
此外,动物来源必须充足,选用多胎分娩的动物对扩大样本和重复实验是有益的。尤其对慢性疾病模型来说,动物须有一定的生存期,便于长期观察使用,以免模型完成时动物已频于或毙于。
在自然环境中观察有助于正确评价自然发病率和率。但记录困难,在实验条件下维持有一定难度,且对人和家畜有直接和间接的威胁,使用时要特别加以注意。因此,模型时必须注意动物种群的选择,要了解各类动物种群的特点和对动物的影响。
实验动物的给法
(一)注she给药法
1. 皮射 注she时用左手拇指及食指轻轻捏起皮肤,右手持将针头刺入,固定后即可进行注射。一般小鼠在背部或前肢腋下,大鼠在背部或侧下腹部;豚鼠在后大腿内侧、背部等脂肪少的部位;主要模拟了人类yi郁的核心症状即快感缺乏,同时模拟了其他重型yi郁障碍的症状表现。兔在背部或耳根部注she;蛙可在脊背部淋巴囊注射;狗多在大腿外侧注she,拔针时,轻按片刻,防药液逸出。
2. 皮内注she 此法用于观察皮肤血管的通透性变化或观察皮内反应。 如将一定量的性同位素溶液、颜料或致炎物质、等注入皮内,观察其消失速度和局部血液循环变化,作为皮肤血管通透性观察指标之一。方法是:将动物注射部位的毛剪去,消毒后,用皮试针头紧贴皮肤皮层刺入皮内,然后使针头向上挑起并再稍刺入,即可注射药液。此外,实验中使用雄性动物雄鼠是因为雄性动物在向gan硬化转化过程中比雌性动物更为均一。注射后可见皮肤表面鼓起一白色小皮丘。
3. 肌肉注she 当给动物注she不溶于水而混悬于油或其他溶剂中的时,常采用肌肉注she。肌肉注she一般选用肌肉发达、无大血管经过的部位,多选臀部。
注she时针头要垂直快速刺入肌肉,如无回血现象即可注she。给大、小鼠作肌肉注she时,选大腿外侧肌肉进行注she。
4. 腹腔注she 先将动物固定,腹部用酒精棉球擦试消毒,然后在左或右侧腹部将针头刺入皮下,沿皮下向前推进约0.5厘米,再使针头与皮肤呈45 度角方向穿过腹肌刺入腹腔,此时有落空感,回抽无肠液、尿液后,缓缓推入药液。此法大小鼠用的较多。
5. 静脉注she 是将药液直接注she于静脉管内,使其随着血液分布全身,迅速奏效。但排泄较快,作用时间较短。
小鼠、大鼠的静脉注she:常采用尾静脉注she。鼠尾静脉共有3根, 左右两侧和背侧各1根,两侧尾静脉比较容易固定,故常被采用。5cm的小站台上,对照组大鼠置于直径15cm的大站台上,周围是水环境,水深3cm,平台在水面以上1cm,于平台以上14cm处放笼罩,上面放水和食物。操作时,先将动物固定在暴露尾部的固定器内(可用烧杯、铁丝罩或粗试管等物代替),用75%酒精棉球反复擦试使血管扩张, 并可使表皮角质软化,以左手拇指和食指捏住鼠尾两侧,使静脉充盈,注she时针头尽量采取与尾部平行的角度进针。
实验动物大、小鼠的采血方法
1、动物实验中剪尾采血:需血量少时可用此方法。将动物固定,显露尾部,将尾尘剪去约5mm,从尾根部向尾端部,血即从断端流出。若用二棉球涂擦尾部或事先将鼠尾浸在45℃水中数分钟,使尾部血管充盈,可采到较多的血,但注意二可致溶血。也可用锋利刀片割破尾动脉或尾静脉,让血液自行流出,采血后,消毒,止血。如将动物取血量可更多些。多种临床对抑yu症有效的yao物和zhi疗方法可逆转“获得性无助”现象。小鼠每次采血约0.1ml,大鼠约0.4 ml。为了多次反复取血应尽量从鼠尾末端开始。
2、动物实验中摘眼球采血:此法常用于鼠类大量采血。用左手固定动物,压迫眼球,尽量使眼球突出,右手用无钩弯镊子或弯止血钳迅速摘除眼球,立即将鼠倒置,头朝下,眼眶内很快流出血液。一般只适用于一次采血。此外,动物来源必须充足,选用多胎分娩的动物对扩大样本和重复实验是有益的。大部动物采血后可以存活,可采另一侧眼球取血。
大鼠后眼框静脉丛取血方法
4、动物实验中颈静脉或颈动脉采血:将鼠,剪去一侧颈部外侧被毛,作颈静脉或颈动脉分离手术,用即可抽出所需血量。也可插入导管,反复采血。
5、断头采血:操作者左手拇指和食指握住鼠颈部,头朝下,用利剪在头颈间1/2处迅速剪动物头部,提起动物,血液即可流入准备好的容器中。
6、心脏采血:将动物,使其仰位固定,剪去胸前区毛,消毒皮肤,在左侧第3—4肋间选择心博强处穿刺,血液借心脏跳动的力量进入。亦可在动物后,切开动物胸腔,直视心脏内抽血或剪破心脏,直接用、吸管等吸血。
1.2 实验方法优势
这种实验方法相对于被动回避(穿梭实验、避暗实验)等实验的优点在于:这种迷宫利用了啮齿类动物对新异环境天然探究的自然习性,不需要动物学习任何规则来趋利避害,能够有效地反映出动物对新异环境的识别记忆能力。
2、电刺激Y迷宫测试原理
该测试方法更多的应用于检测实验动物空间辨别的学习记忆能力。
2.1 电刺激Y迷宫使用方法
Y 迷宫由3 个相同的臂组成,分别称为Ⅰ区、Ⅱ区、Ⅲ区。通常把下臂( Ⅰ臂)定为起步区,左侧( Ⅱ臂) 为安全区,右侧( Ⅲ臂) 为区,三臂相交处为隔离区(0 区) 。迷宫底铺以铜棒,可以通电刺激。三臂顶端各装有15W 的信号灯。实验前先将大鼠放入迷宫,让其适应5 min ,训练组大鼠在起步区予以致其逃至安全区,灯光持续15 s ,然后熄灯休息45 s ,开始下一次操作。每次实验在每只大鼠上重复20 次为一轮。同时应该一般饲养员较熟悉而便于饲养的动物作研究对象,这样,就无需特殊的饲养设施和转运条件,经济上和技术上容易得到保证。实验在黑暗、安静的环境中进行。凡大鼠受后10 s 内一次性从起步区逃至安全区的反应称为“正确反应”,否则为“错误反应”。以连续10 次中正确反应达9 次或以上定为学会标准。达到学会标准所需的次数表示学习记忆成绩,次数少说明学习能力强。