一、实验概述
八臂迷宫（radial arm maze）实验是为常用的评价动物学习记忆能力的模型之一，由Olton等人于20世纪70年代中期建立。其基本依据是，控制进食的动物受食物的驱使对迷宫各臂进行探究，经过一定时间的训练，动物可记住食物在迷宫中的空间位置。该方法可同时测定动物的工作记忆（working memory）和参考记忆（reference memory）。八臂迷宫操作简便、可行，而且能区分短期的工作记忆和长期的参考记忆，现已被广泛用于学习记忆功能评价。
二、实验仪器
三、实验指标区域指标开臂1停留时间、活动路程、进入次数、潜伏期、平均速度（X轴投影速度）开臂2停留时间、活动路程、进入次数、潜伏期、平均速度（X轴投影速度）开臂3停留时间、活动路程、进入次数、潜伏期、平均速度（X轴投影速度）其他臂停留时间、活动路程、进入次数、潜伏期、平均速度（X轴投影速度）四、实验方法及应用
1) 动物适应实验环境1周后，称重，禁食24小时。此后每天训练结束后限制性地给予正常食料（据体重不同，大鼠16-20g，小鼠2-3g），以使体重保持在正常进食大鼠的80%~85%。
2) 第二天，迷宫各臂及中央区分撒着食物颗粒（每只4~5粒，直径约3~4mm）。然后，同时将4只动物置于迷宫中央（通往各臂的门打开）。让其自由摄食、探究10min。
3) 第三天，重复第二天的训练。这一过程让动物在没有很强的应激条件下熟悉迷宫环境。
4) 第四天起，动物单个进行训练：在每个臂靠近外端食盒处各放一颗食粒，让动物自由摄食。食粒吃完或10min后将动物取出。
5) 第五天，将食物放在食盒内，重复前一天的训练，一天2次。
6) 第六天以后，随机选4个臂，每个臂放一颗食粒；各臂门关闭，将动物放在迷宫中央；30s后，臂门打开，让动物在迷宫中自由活动并摄取食粒，直到动物吃完所有4个臂的食粒。如经10min食粒仍未吃完，则实验终止。每天训练两次，其间间隔1h以上。
一、主要试剂材料
细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)（Solarbio，G0170）
DMEM（Hyclone，SH30023）
FBS（Hyclone，SH30070.03）
青链mei素（Hyclone，SV30010）
胰酶（Hyclone，SH30042.01）
PBS（南京生兴，SN331）
CO2培养箱（Thermo fisher，3131）
Confocal荧光显微镜（Zeiss，LSM710）
二、实验方案
1、MG63及其耐药株培养在含10%胎牛xue清的DMEM完全培养基中培养，培养在37℃含5%CO2的细胞培养箱中培养，当细胞增殖至80%-90%时，用胰酶将细胞消化下来，按照1:3比例传代。
2、将1×106个细胞种在3.5cm玻璃底培养皿中，将细胞放入培养箱中培养过夜后，分别加入miR-22、cisp1atin、cisp1atin和miR-22后，将细胞放入培养箱中培养12h、24h。3、将细胞从培养箱中取出，去除培养基，用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞1次，弃上清。4、加入适量MDC Stain，轻轻混匀。5、室温避光染色15～45min。6、用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞2次，弃上清。7、加入100μl的Collection buffer重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。8、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，拍照。