难点与关键点
将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键，也是难点。首先准确找到主动脉，这是此步骤的要点。可用温生理盐水将胸腔内的血液冲洗干净，用镊子轻轻夹住心 外膜（夹的越少越好，以免影响取材）将心脏向左上方提起，即可看清主动脉，又可使灌注针很容易地插入主动脉内。插入时动作要慢，针尖方向不要偏向右侧，以 免刺入右心房，如果感到有阻力，则将针退后、调整方向重新进针，直到进入主动脉，灌注针进入主动脉后可在心脏的上方看到其位置，灌注针进入主动脉的长度 好为 3~5 毫米，然后用丝线扎紧。切勿将灌注针放在左心室内，这样由于主动脉瓣的关闭，灌注液很难进入主动脉，而是沿着心室的切口流出，致使灌注失败。另 外，灌注针插入成功后，一定要用剪刀剪开右心耳而不是右心室，这是灌流液的出口。剪开心尖的位置一定要掌握好，不能偏右使灌注针插入右心室。
因 SP 是单只大鼠进行实验且在实验中大鼠的活动空间受限，故有学者认为以上的临床与实验室表现可能与大鼠的群体隔离或活动空间受限有关，进一步研究发现，在实验前群体饲养的动物当与群体隔离后也会出现攻击行为增加，血浆中 CORT 增加，功能抑制等表现。大鼠活动空间受限也可引起血浆中 CORT 的水平的增加，这些结果与单平台睡眠剥夺实验中见到的类似，为克服SP 中大鼠与群体分离及活动空间受限的缺点，在 SP 基础上进一步发展为多平台睡眠剥夺法。
1.2多平台睡眠剥夺法
M P法于1981年先应用在大鼠睡眠剥夺实验中，在 M P中为扩展大鼠的活动空间将台由 SP 中的 1 个增加至 7 个，仍将1只大鼠放在台间进行睡眠剥夺试验，因大鼠可以在 7个台间自由活动，故活动范围较 SP 中有明显增大。经实验比较，在M P中反映应激增强的一些指标，如上腺重量增加和胸腺重量减少仍然存在，甚至在大鼠血液中 ACTH %CORT 的增加及上腺重量的增加较SP的更高，提示 M P较SP有更强的应激性!考虑到大鼠为群居动物，单只大鼠实验易导致与所在群体的隔离。为克服群体隔离所带来的应激反应，有学者将 M P 法进一步改良发展为改良多平台睡眠剥夺法!
3轻柔刺激法
此方法在短期的睡眠剥夺实验中应用较多，当实验人员通过观察大鼠行为或通过脑电波监护观察到大鼠进入睡眠时，通过轻轻拍打大鼠笼子或应用声音、光线的刺激促使大鼠保持清醒，必要时还可用纸卷、铅笔或用手直接触摸大鼠使大鼠无法进入睡眠。注意不能将大鼠移出笼外!此方法简单易行，在脑电监护情况下可进行 TSD 或 SSD 实验，在无脑电监护时需要实验人员在旁不间断观察大鼠行为，故较适合行短时间的睡眠剥夺实验。
4睡眠剥夺法
定时给大鼠注she， 此类方法简单易行，操作方便，不需要特殊仪器。缺点是大鼠存在个体差异， 睡眠剥夺的效果及程度及不易掌握。多用在研究某些特殊药理作用的实验中。
小鼠模型构建方法
：
可由细菌、真菌或病毒引起。
微生物（如引起的）可。衣原体和单纯病毒也可引起。男性，十分常见。也可女性，但、、、和等更易于被。 也可以由通常引起其他的细菌引起，如大肠。
实验材料
小鼠
铜绿假单胞菌PAO1
方法步骤
1、小鼠称量体重后按照重量使用10%水合氯醛进行。
2、后的小鼠仰卧保定。
3、小鼠腹部剃毛。使用碘酊消毒下腹部，在下腹部沿腹中线剪开一个1.5cm的口子，暴露膀胱。
4、经插管将铜绿假单胞菌PAO1 (1×108CFU/ml) 接种到膀胱中。
模型小鼠的膀胱表现出严重的、
中性粒细胞的大量浸润以及固有层的溃疡和水肿。