2.2旋转圆筒睡眠剥夺法
此方法于 1979 年先应用于睡眠剥夺实验中,设备主要由一柱形圆筒及一小型慢速马达构成。圆筒直径 30 cm,高 30 cm 。圆筒底由 PVC (聚)构成,侧壁由直径为 10.4 m m 的 PVC 杆围成。杆长度 30 cm,杆之间间隔 15.5 m m,圆筒与小型马达相连。马达转速为每 45 s转 1 圈(也有学者应用每 m in 转 1 圈)。至少在实验前 2 d每天将大鼠放入圆筒中适应环境 1 次,适应时间不少于 3 h。实验时将马达按 45 s每1 圈进行匀速转动,通过圆筒的转动带动大鼠不停运动而达到睡眠剥夺的目的。此类方法简单易行,睡眠剥夺效果明显。缺点是长时间不停运动可引起机体的运动后应激反应及身体疲劳,可能干扰睡眠剥夺实验结果! 此类方法发展出多种变化,有实验者在进行新生大鼠睡眠剥夺时将筒旋转速调节至 2~3 r/m in后期逐渐增加至 6~7 r/m in。
敲低效果验证方法:
RT-PCR
检测mRNA,是否仍存在靶 mRNA?或是否敲低成功?
这种方法非常灵敏,但无法准确预测蛋白质水平。
蛋白质印迹实验
使用抗ti来检测样品中的靶蛋白表达以及多种相关蛋白质表达,从而观察靶蛋白敲除对其它蛋白质的影响。
免yi细胞化学法
可检测是否存在敲低蛋白。
其优势在于利用双重染色法,可同时检查敲除对其它蛋白质表达的影响以及其它蛋白质在细胞中的位置。
2 测试原理
2.1 动物实验和人体食品试验所列指标为强制性项目。
2.2 在动物实验中,选择大鼠肥胖模型法和大鼠肥胖预防模型法中的一种。
2.3 减少体内多余的脂肪不仅仅是减肥。
2.4 引起腹泻或抑制食欲的试验样品不能作为减肥功能食品。
2.5 每日的营养摄入量应基本保证机体正常生命活动的需要。
2.6 对身体健康无明显损害。
2.7 同一批试验样品在实验前应进行违禁药品检测。
2.9 对于不替代主食的减肥功能试验,应观察试验前后受试者的饮食和运动情况。
2.10 代主食减肥功能试验,除执行不代主食的设计指标外,还应设置体力活动、情绪、工作能力等测量表,排除有服用测试样品后无相应的fu面影响。结合替代主食的测试样品配方,对每日膳食进行了营养评估。
2.11 进行人体食品试验时,应进一步观察被检样品的食品安全性。